本文是一篇臨床醫(yī)學職稱論文范文，針對銅綠假單胞菌整合子耐藥性展開研究，發(fā)表在《廣西中醫(yī)學院學報》上，雜志是廣西中醫(yī)學院主辦的省級中醫(yī)藥學術(shù)期刊，國內(nèi)統(tǒng)一刊號：CN45-1245/R，國際標準刊號：1008-7486，國內(nèi)外公開發(fā)行，季刊，大16開，逢季末月出版。本刊主要反映我院及區(qū)內(nèi)外中西醫(yī)藥科研、臨床與教學等方面的新成果、新信息。內(nèi)容涉及中醫(yī)、西醫(yī)及其他社會、自然科學，開設有理論研究、臨床報道、中西醫(yī)結(jié)合臨床、藥學研究、名醫(yī)經(jīng)驗、醫(yī)案評析、教學研究與管理、中醫(yī)發(fā)展戰(zhàn)略、針灸推拿、醫(yī)史文獻等欄目。本刊既是名老中醫(yī)、專家學者的講臺，又是中醫(yī)藥新秀的天地。

　　【摘要】 目的 在銅綠假單胞菌中檢測1類整合子并分析整合子對細菌耐藥性的影響。 方法 用VITEK-AMS 微生物自動分析儀鑒定細菌和藥敏試驗，用PCR方法擴增I類整合酶基因，經(jīng)電泳后檢測擴增產(chǎn)物。 結(jié)果 158株銅綠假單胞菌中檢測出1類整合子42株，檢出率為26.6%。1類整合子陽性菌對氨基糖苷類、喹諾酮類及頭孢菌素類藥物表現(xiàn)出較高的耐藥率。攜帶1類整合子菌株易表現(xiàn)出對至少4種抗菌素的多重耐藥性，其多重耐藥率為68.6%(33/48)，明顯高于1類整合子陰性菌株(28.6%)，P<0.05。 結(jié)論 1類整合子廣泛存在銅綠假單胞菌中,1類整合子對細菌多重耐藥性的產(chǎn)生和傳播起著重要作用，應加強臨床細菌基因水平的耐藥監(jiān)測，采取有效措施防止耐藥性的傳播。

　　【關(guān)鍵詞】 銅綠假單胞菌,整合子,多重耐藥,臨床醫(yī)學職稱論文范文

　　銅綠假單胞菌作為醫(yī)院感染的重要的條件致病菌，在長期應用激素、免疫抑制劑，進行腫瘤化療、放射治療等導致病人免疫功能低下，以及手術(shù)后或某些治療操作后的病人易導致本菌感染，該菌常常具有多重耐藥的特點，因此其所造成的感染難以治愈，病死率高。而近年證實整合子介導的多重耐藥基因也是造成銅綠假單胞菌多重耐藥的主要原因之一。世界臨床醫(yī)學《醫(yī)藥工程設計》是國內(nèi)醫(yī)藥行業(yè)中惟一的工程技術(shù)刊物，自開辦以來一貫堅持辦刊宗旨，遵循國家關(guān)于醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展規(guī)劃和技術(shù)政策。重點介紹國內(nèi)外醫(yī)藥工程技術(shù)和發(fā)展動向，報道可借鑒的其他行業(yè)如化工、輕工、食品等行業(yè)的工程設計技術(shù)，旨在通過技術(shù)和信息的交流，溝通科研、設計、生產(chǎn)的聯(lián)系，以促進我國醫(yī)藥保健事業(yè)的發(fā)展。

　　整合子是與細菌耐藥性傳播有關(guān)的基因系統(tǒng)，整合子通過捕捉和整合細菌耐藥基因，在細菌耐藥性的傳播和擴散中起了重要的作用。整合子通過位點特異性的基因重組可整合多種耐藥基因?qū)�細菌多重耐藥的形成起著重要作用職稱論文。

　　本文對158株銅綠假單胞菌進行分析，以探討銅綠假單胞菌整合子與其多重耐藥性之間的關(guān)系。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 菌株來源

　　2009年10月～2010年5月從我院臨床標本中分離的銅綠假單胞菌158株。標本分別來自老年病房(53株)、呼吸科病房(49株)、普外科病房(28株)、泌尿科病房(16株)和內(nèi)分泌病房(12株)。菌株分別分離自痰標本(68株)、膿汁(42株)、咽拭子(18株)、尿標本(12株)、傷口分泌物(10株)和血液(8株)。標準質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌(ATCC27853)。攜帶1型整合子銅綠假單胞菌為本實驗室分離株經(jīng)測序證實，作為PCR實驗陽性對照。

　　1.1.2 鑒定卡片

　　全自動微生物分析儀(VITEK-AMS)采用的GNI鑒定卡、GNS藥敏卡均購自法國Biomerievx公司,GNS藥敏卡包括氨芐青霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、丁胺卡那、復方新諾明、頭孢噻肟、亞胺培南11種抗菌藥物職稱論文。

　　1.1.3 PCR試劑

　　TaqDNA聚合酶,4種dNTP混合液,DNA分子標準參照物購自Takara公司;瓊脂糖,溴化乙啶等常用分子生物學試劑購自上海生工公司。

　　1.1.4 主要儀器

　　VITEK-AMS自動鑒定系統(tǒng)購自法國Biomerievx公司;PCR擴增儀、DNA/RNA/protein analyzer分析儀和高速低溫離心機購自德國eppendorf公司;PCR電泳儀為北京崇文東方儀器廠產(chǎn)品;DGW-99型臺式高速微型離心機為寧波新芝科器研究所產(chǎn)品。

　　1.2實驗方法

　　1.2.1 菌株鑒定

　　所有菌株都用VITEK AMS 分析儀GNI細菌鑒定卡進行菌種鑒定。體外藥物敏感試驗：采用GNS檢測卡測定13種抗菌藥物對158株銅綠假單胞菌的MIC值，操作方法按照VITEK AMS規(guī)定的方法進行。

　　1.2.2加熱裂解法制備DNA模板

　　:用Luria-Bertani液體培養(yǎng)基200r/min振蕩培養(yǎng)8h獲得對數(shù)生長期菌株。攜帶1型整合子銅綠假單胞菌為本實驗室分離株經(jīng)測序證實，作為PCR實驗陽性對照。

　　1.2.3篩選1型整合子陽性菌株

　　用PCR方法擴增整合子可變區(qū)，以整合子上游引物ggcatccaagcagcaagc和整合子可變區(qū)下游引物aagcagacttgacctgat，進行PCR擴增。50ulPCR反應體系為:DNA100ng、25mmol/LMgCl2、0.4mmol/LdNTP、0.4pmol/L引物和2.5UTaq酶。PCR反應循環(huán)參數(shù)設置如下94℃預變性4分鐘;94℃45秒，55℃，45秒，72℃3分鐘，循環(huán)35次;最后72℃延伸10分鐘。

　　1.2.4 PCR反應結(jié)束后取產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下拍照記錄結(jié)果。

　　1.2.5 統(tǒng)計學處理

　　采用χ2檢驗，P<0.05有顯著差異。統(tǒng)計軟件為SPSS10.0。

　　2 結(jié)果

　　2.1 1類整合子基因檢測結(jié)果

　　全部158株銅綠假單胞菌的DNA上有42株檢測到I類整合子，占細菌總數(shù)的26.6%。1類整合子的大小分別為600bp、1000bp、1600bp、1900bp和2100bp。根據(jù)各株細菌質(zhì)粒DNA上檢測到1類整合子的大小和數(shù)目，細菌質(zhì)粒NDA上的整合子可分為5種整合子譜。

　　2.2 1類整合子陽性菌株與耐藥性的關(guān)系

　　對比1類整合子陽性菌株與陰性菌株對抗菌藥物的耐藥率，并做統(tǒng)計分析，結(jié)果見表1。

　　1類整合子陰性菌株對11種抗菌藥物完全敏感率為54.4%(86/158)。1類整合子陽性菌株更易表現(xiàn)出對青霉素、喹諾酮類、磺胺類藥物的耐藥。耐藥率最高的是復方新諾明(100%)其次為氨芐青霉素(90.5%)和慶大霉素(85.7%)，丁胺卡那也表現(xiàn)出較高的耐藥率(76.7%)。1類整合子陽性菌株對6種藥物的耐藥率顯著高于陰性菌株，P0.05。

　　2.3 1類整合子與多重耐藥率的相關(guān)性

　　多重耐藥率(耐4種以上抗生素)為62.0%(98/158)，其中1類整合子陽性菌株多重耐藥率占85.7%(36/42)，陰性菌株多重耐藥率為20.7%(24/116)。1類整合子陽性菌株多重耐藥率明顯高于陰性株，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=18.23，P0.01)。

　　3 討論

　　整合子是存在于細菌質(zhì)粒、染色體或轉(zhuǎn)座子上的一種遺傳結(jié)構(gòu)，可以捕獲耐藥基因，使細菌表現(xiàn)為對抗生素的多重耐藥[1]給臨床治療帶來極大的困難。整合子本身不能移動，但常作為轉(zhuǎn)座子的一部分或借助可移動性質(zhì)粒在同種細菌或不同種細菌間播散，造成細菌耐藥性的擴大，是細菌多重耐藥迅速發(fā)展的重要原因。根據(jù)整合酶的不同分為6 類在臨床分離的菌株中以 1類合子最為常見。1類整合子基本結(jié)構(gòu)由三部分組成,兩端為高度保守的序列，分別稱作5’CS和3’CS,5’CS和3’CS之間為可變區(qū)，可變區(qū)由一個或多個外來插入的基因盒組成。在整合酶的催化下.通過位點重組系統(tǒng)整合外來耐藥基因，使耐藥基因得到不斷的累積，從而使細菌具有耐藥性和多重耐藥性。目前在1類整合子中發(fā)現(xiàn)的基因盒已超過80種，大部分是耐藥基因盒，編碼產(chǎn)物可賦予細菌對幾乎全部臨床抗生素耐藥。

　　本研究顯示，銅綠假單胞菌在呼吸道的感染占首位為54.5%(86/158)，這與大多數(shù)文獻的報導相符合究其原因，可能與銅綠假單胞菌容易定植于呼吸道，且由于氣管插管、流感病毒感染及其他各種炎癥等因素損害了呼吸道黏膜，在鞭毛或蛋白酶作用下，細菌易于移生、粘附有關(guān)。傷口創(chuàng)面也較易受其侵害，檢出率32.9%(52/158)，居第二位，與其存在廣泛及醫(yī)院環(huán)境的隔離消毒程度關(guān)系頗大。實驗證明，我院患者分離的銅綠假單胞菌對多種抗生素出現(xiàn)高耐藥，尤其是表現(xiàn)出對青霉素類、頭孢菌素類、氨基糖苷類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類以及磺胺類等的多重耐藥性，更是不容忽視。

　　研究表明1型整合子在銅綠假單胞菌耐藥性產(chǎn)生的遺傳機制上起著重要作用，它是引起細菌多重耐藥的重要因素。由于抗生素使用量和種類日趨增多，使細菌生存面臨更大的抗生素選擇壓力。本次研究客觀反映了我院銅綠假單胞菌的整合子攜帶情況，分析本次結(jié)果發(fā)現(xiàn)在158株銅綠假單胞菌中檢出42株整合子陽性，檢出率為26.6%，與其他報道銅綠假單胞菌整合子檢出率不完全相同，這可能是由于地域的不同所造成的，也可能與菌株的來源有關(guān)。整合子陽性的細菌表現(xiàn)出多重耐藥性比整合子陰性菌高，證實了整合子介導了多重耐藥性產(chǎn)生。但由于銅綠假單胞菌耐藥機制比較復雜，耐藥性還與抗菌藥物作用的靶位改變、OprD蛋白缺失引起的菌膜通透性下降、菌體細胞膜上主動外排泵系統(tǒng)的上調(diào)以及產(chǎn)生B一內(nèi)酰胺酶等機制有關(guān)，對于銅綠假單胞菌的耐藥機制還有待于進一步研究，以采取有效措施控制其耐藥性傳播。抗生素的使用越廣泛，使攜帶新耐藥基因的優(yōu)勢菌越多，并導致攜帶耐藥基因菌群量更大，為1類整合子多重耐藥細菌提供了選擇性壓力，可能使其耐藥種類更多，傳播更廣泛。因此，這種耐藥機制引起的細菌耐藥應該引起臨床的足夠重視，加大監(jiān)測力度，預防醫(yī)院感染的發(fā)生。