藥劑在應(yīng)用過程中是非常嚴謹?shù)�，一些新發(fā)明和新觀點也是通過不斷的實驗總結(jié)出來的 。很多醫(yī)護人員在工作之余也會做一些關(guān)于藥劑的實驗，并整理成論文的形式發(fā)表出來以供行業(yè)交流用。本文是一篇醫(yī)學論文發(fā)表范文，主要論述了奧硝唑氯化鈉注射液無菌檢查方法建立。更多醫(yī)學論文可以參考搜論文知識網(wǎng)醫(yī)學論文欄目。

　　摘要：奧硝唑在體內(nèi)主要以具有細胞毒作用的原藥和具有細胞毒作用的中間代謝活性產(chǎn)物，作用于厭氧菌、阿米巴蟲、賈滴蟲和毛滴蟲細胞的DNA，使其螺旋結(jié)構(gòu)段裂或阻斷其轉(zhuǎn)錄復制而至其死亡，達到抗菌抗原生質(zhì)的目的。目的 建立適宜的奧硝唑氯化鈉注射液無菌檢查方法，對所建立方法進行方法學驗證，確認所建立的檢查方法適合本品無菌檢查，使藥品質(zhì)量得到有效控制。方法 采用薄膜過濾，探索該制劑的無菌檢查方法。結(jié)果 所建立的無菌檢查方法適用于奧硝唑氯化鈉注射液的無菌檢查。

　　關(guān)鍵詞：醫(yī)學論文發(fā)表,方法學驗證,奧硝唑氯化鈉注射液,薄膜過濾法

　　奧硝唑在體內(nèi)主要以具有細胞毒作用的原藥和具有細胞毒作用的中間代謝活性產(chǎn)物，作用于厭氧菌、阿米巴蟲、賈滴蟲和毛滴蟲細胞的DNA，使其螺旋結(jié)構(gòu)段裂或阻斷其轉(zhuǎn)錄復制而至其死亡，達到抗菌抗原生質(zhì)的目的。依據(jù)《中國藥典》無菌檢查相關(guān)規(guī)定及參閱相關(guān)文獻[1-6]，本文采用薄膜過濾法對奧硝唑氯化鈉注射液進行無菌方法驗證，確定本品檢驗方法及檢驗條件。

　　1.材料與儀器

　　1.1 試藥

　　奧硝唑氯化鈉注射液，規(guī)格：100ml：奧硝唑0.25g與氯化鈉0.9g，四川科倫藥業(yè)股份有限公司

　　1.2 儀器

　　HTY-2000B 型智能集菌儀 杭州泰林生物技術(shù)有限公司，SW-CJ 超凈工作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司，BSC-1000B型生物安全柜 北京東林哈爾儀器有限公司，LRH型生物培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司。

　　1.3 驗證用菌株

　　金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌，以上菌種由中檢所提供。

　　1.4 培養(yǎng)基

　　營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號：140110)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號：140303)、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基(批號：140706)、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(批號：140711)、改良馬丁培養(yǎng)基(批號：140641)。

　　2.方法與結(jié)果

　　2.1 實驗環(huán)境

　　在B級下局部A級的單向流區(qū)域內(nèi)進行，實驗過程中嚴格按照無菌操作，防止微生物污染。

　　2.2 接種及菌液制備

　　取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌斜面培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯中，于30℃培養(yǎng)。取白色念珠菌斜面培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于25℃培養(yǎng)。另取生孢梭菌液體培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)。

　　取經(jīng)35℃培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物各1ml及生孢梭菌硫乙醇培養(yǎng)物1ml分別加入到9ml的營養(yǎng)肉湯中，依次稀釋，枯草芽孢桿菌至10-5，金黃色葡萄球菌至10-6，銅綠假單胞菌至10-7，生孢梭菌至10-6。 取經(jīng)25.8℃培養(yǎng)24小時的白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)物1ml，加至營養(yǎng)肉湯中，依次稀釋至10-6。取經(jīng)培養(yǎng)5天的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加3ml營養(yǎng)肉湯洗下孢子依次稀釋至10-4，備用。上述各菌株的培養(yǎng)物均為第二代培養(yǎng)物。

　　2.3 方法驗證

　　按照《中國藥典》2010版藥典無菌檢查項下方法，每種培養(yǎng)基過濾樣品10瓶。用0.1%蛋白胨水溶液沖洗，每筒總沖洗量為500ml，每次100ml。分別加入已制備好的上述各菌液1ml，過濾，向金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌筒內(nèi)分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。32～35℃培養(yǎng)5天，逐日觀察，向白色念珠菌、黑曲霉筒內(nèi)分別加入改良馬丁培養(yǎng)基，25～28℃培養(yǎng)5天，逐日觀察。另取6個筒，4筒分別加入上述已制備好的金萄菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌、生孢梭菌菌液，分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。32～35℃培養(yǎng)5天，逐日觀察，向另2個筒分別加入白色念珠菌及黑曲霉菌液各1ml，分別加入100ml改良馬丁培養(yǎng)基，25～28℃培養(yǎng)5天，逐日觀察。

　　供試品對照組：取供試品，共制備2組。用適量沖洗液潤濕濾膜，將供試品過濾。用0.1%蛋白胨水溶液沖洗，每筒總沖洗量為500ml，每次100ml。每次沖洗到一半時，晃動杯壁，沖洗完畢，向2個筒分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，25～28℃培養(yǎng)5天，逐日觀察。陰性對照：取0.1%蛋白胨水溶液適量，置入兩個濾筒中過濾，分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，25～28℃培養(yǎng)5天，逐日觀察。空白對照：取2個筒，將硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基分別加入到筒中，25～28℃培養(yǎng)5天，逐日觀察。取制備好的金葡色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌菌液各1ml于濾筒中，加適量沖洗液沖洗，取出濾膜，菌面朝上，貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上，30～35℃培養(yǎng)48h。黑曲霉菌菌液1ml于平皿中。傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基10ml，于25～28℃培養(yǎng)72h。

　　2.4 結(jié)果

　　活菌計數(shù)見表1(說明：如不附表，可將該句話和表刪掉)，與對照組比較，含供試品的各濾筒中試驗菌均生長良好，并與各對照組中相應(yīng)菌生長情況相似。供試品對照組、陰性對照組和空白對照組均無菌落生長。供試品采用濾膜過濾法檢查，在此檢驗量和沖洗量的檢驗條件下無抑菌作用。因此，可照此檢查法和檢查條件檢查奧硝唑氯化鈉注射液的無菌檢驗。

　　3.討論

　　薄膜過濾法為《中國藥典》收載的無菌檢查方法中的檢驗方法之一，采用封閉的薄膜過濾器，把細菌等微生物截留在濾膜上，經(jīng)過對培養(yǎng)基的培養(yǎng)，使微生物能被檢出，檢查過程中需嚴格遵守無菌檢查操作規(guī)程。在實驗過程中注意使供試品溶液覆蓋濾膜整個表面，根據(jù)試驗結(jié)果確定奧硝唑氯化鈉注射液無菌檢查方法，采用薄膜過濾法檢查，每種培養(yǎng)基過濾樣品10瓶，全量過濾，經(jīng)過驗證，各實驗菌生長良好。可按照此檢查方法對奧硝唑氯化鈉注射液進行無菌檢查。

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